PROTAP PEMERIKSAAN KIMIA KLINIK

PEMERIKSAAN GLUKOSA KIMIA

PEMERIKSAAN GLUKOSA

A.Tujuan                     : Untuk mengetahui kadar glukosa dalam darah

B. Metode                   : GOD-PAP

C. Prinsip                    : Glukosa diukur setelah oksidase enzimatik, adanya glukosidase hidrogen peroksidase di bawah katalisa peroksidase bereaksi dengan phenol dan 4-amino phenazone membentuk zat warna merah violet, quinoneimine sebagai indikator.

D. Bahan                     : Serum

E. Alat                         : 1. Micropipet 10µl & 1000µl           4. Tabung reaksi

                                      2. Blue tipe & yelow tip                    5. Centrifuge  

                                      3. Beackerglass                                 6. Fotometer

F.Reagensia                 :1. Reagen enzim (buffer pH 7,5)

                                      2. Reagen satandar

G.Cara Kerja               :

	Sampel	Standart	Blanko
Sampel	10µl
Standart		10µl
Reagen	1000µl	1000µl	1000µl
Masing – masing tabung dihomogenkan, diinkubasi 10 menit pada suhu 20 – 25 °C atau 5 menit pada suhu 37 °C
Diukur absorbance standar dan sampel terhadap blanko reagen dalam 60menit

Λ      = 546 nm                                Standar  = 200

               Suhu = 25^oC                                    Program = c/st

H. Nilai Rujukan           :         a. Darah segar (puasa) 70 – 100 mg/dl

                                                b. Serum & plasma (puasa) 75 – 115 mg/dl

PEMERIKSAAN  CHOLESTEROL TOTAL

Pemeriksaan                : Cholesterol Total

Tujuan                         : Untuk mengetahui kadar kolesterol seseorang

Metode                        : CHOD-PAP

Prinsip                         : Cholesterol diukurr setelah hidrolisa enzimatik dan oksidasi indikator quinoneimine dibentuk dari hidrogen peroksidase dan 4-aminophenazone. Absorben warna diukur dengan terbentuknya warna yang dibaca pada spektrofotometer dalam phenol dan peroxidase

Bahan                          : Serum

Alat                             : Tabung reaksi

                                      Beacker glass

                                      Pipet automatic

Reagensia                    : Cholesterol liquicolor

Nilai Nomal                 : 200 mg/dl

Cara Kerja                   :

Skema pemipetan	Blanko	R/ Standart	Test
Standart		10 μl
Sampel			10 μl
R/ Cholesterol	1000 μl	1000 μl	1000 μl

-          Dihomogenkan

-          Diinkubasi selama 20 menit pada suhu 20 - 25° C

-          Diukur absorbance sampel tehadap blanko reagen dalam waktu tidak lebih dari 60 menit ( λ = 546 nm, program = c/st, angka faktor = 200,0 mg/dl )

PEMERIKSAAN LDL

A.Tujuan                     : untuk pengukuran kuantitatif LDL-cholesterol (LDL)

B. Metode                   : Test warna-Enzymatik

C. Prinsip                      : Chylomicrons,VLDL dan HDL cholestrol dihilangkan secara khusus melalui reaksi enzymatik.kemudian LDL cholesterol yang tertinggal diukur melalui reaksi enzymatik khusus ,juga memakai surfactans spesific untuk LDL

D. Bahan                     : Serum                            

E. Alat                         : 1. Tabung                             3. Mikropipet                         5. Centrifuge

   2. Beacker Glass                  4. Yellow tip . blue tip            6. Photometer

                                     

F.Reagensia                 : 1. R1

   2. R2

G.Cara Kerja               :

Hangatkan reagen dan kufet sampai 37°C.suhu harus dijaga konstan (±0,5°C) selama test.

	Blankoreagen	Calibrator/sampel
Air	10 µ
Calibrator/Sampel		10 µ
R1	750 µ	750 µ
R2	250 µ	250 µ

             

  Campur dengan hati-hati,inkubasi pada suhu 37°C dan baca absorbance AA calibrator dan sampai terhadap blanko reagen (RB) setelah 5 menit.

F. Nilai Rujukan          :

           

	Laki - Laki	Perempuan
Resiko menurun untuk CHD	<  50 mg/dl	< 63 mg/dl
Resiko meningkat untuk CHD	> 172 mg/dl	> 167 mg/dl

PEMERIKSAAN TRIGLISERIDA

A.Tujuan                     : Untuk mengetahui kadar trigliserida dalam sample

B. Metode                    : GOD-PAP

C. Prinsip                       : Trigliserida diukur setelah hidrolisa enzimatik dengan lipase indicator     quinonemine dibentuk dari hydrogen peroksida 4amino pryme chlorophenol dibawah pengaruh katalisa peroksida

D. Bahan                     : Serum

E. Alat                         : 1. Tabung                             4. Mikropipet

   2. Beacker Glass                   5. Yellow tip . blue tip

   3. Fotometer 4010

F.Reagensia                 : 1. Reagen enzym

   2. Reagen standart   

G.Cara Kerja                :

	Blanko	Standar	Tes
Standar		10 ul
Sampel			10 ul
Rg Enzym	1000ul	1000 ul	1000 ul
Dicampur diinkubasi pada 20-25°C selama 10 menit

Λ         = 546 nm                                Standar  = 200

            Suhu    = 25^oC                                                Program = c/s

PEMERIKSAAN TOTAL PROTEIN

A.    Pemeriksaan                :     Total Protein

B.     Tujuan                         :     Untuk mengetahui kadar protein dalam serum

C.     Metode                        :     Biuret

D.    Prinsip                         :     Ion tembaga bereaksi dengan protein dalam media alkali

membentuk kompleks ungu. Absorbans kompleks ini sebanding dengan konsentrasi protein dalam serum.

E.     Reagen                        :     4 x 100 ml atau 1000 ml reagen warna

·         Natrium hidroksida                 200 mmol/l

·         Kalium natrium tartrat                        32 mmol/l

·         Cuprum sulfat                         18 mmol/l

·         Kalium iodida                         30 mmol/l

F.      Bahan                          :     Serum, plasma heparin atau EDTA

G.    Alat                             :     Tabung reaksi , mikropipet 20 µl , 1000 µl, blue and yellow tip,

                                          beacker glass, fotometer

H.    Cara kerja                    :

·         Filter                :     546 nm

·         Program           :     C/F

·         Tebal kuvet     :     1 cm

·         Temperature    :     20-25⁰ C

·         Pengukuran terhadap blanko reagen

·         Factor              :     19,00

	Sampel	Blanko
Sampel	20 µl
Blanko	1000 µl	1000 µl
Dicampur, diinkubasi 20 menit dengan suhu 20-250C. diukur absorbans sampel terhadap blanko reagen dalam waktu 30 menit.

I.      Perhitungan                  :

      C = 19 x ΔA (g/dl) atau C = 190 x ΔA (g/l)

J.       Nilai normal dalam serum atau plasma :

Bayi                             : 4,6 – 7.0 g/dl  atau 46 – 70 g/l

3 tahun s/d dewasa     : 6,6 – 8,7 g/dl  atau 66 – 77 g/l

PEMERIKSAAN  ALBUMIN

A.    Tujuan             : Untuk mengetahui kadar albumin dalam serum penderita.

B.     Metode            : BCG (Bromcresol Green

C.     Prinsip             :Bromcresol Green dengan albumin dalam larutan buffer sitrat membentuk

kompleks warna.Absorbance dari kompleks warna ini proporsional dengan konsentrasi albumin dalam sampel.

D.    Reagen                        :Reagen warna dan Standart

E.     Bahan              :Serum atau plasma

F.      Alat                 : ●Fotometer

  ●Pipet Automatik 10 dan 1000

  ●Beacker Glass

  ●Tabung Reaksi

  ●Blue dan Yellow tipe

G.    Cara Kerja       :    Panjang gelombang            546nm             Program           c/st

  Tebal Kuvet              1cm                            

  Temperatur                20-25ᵒC

  Pengukuran terhadap            Blanko Reagen

	Blanko	Standart	Test
Sampel	-	-	10
Standart	-	10	-
Reagen Warna	1000	1000	1000
Campur,diinkubasi 5 menit,ukur absorbance standart dan sampel terhadap blanko reagen dalam waktu 30 menit.

H.    Nilai Rujukan  :Dalam serum atau plasma 3,8-5,1 gr/dl atau 38-51 gr/l

Pemeriksaan UREUM

A.Tujuan                     : Untuk mengetahui kadar ureum dalam serum

B. Metode                   : Berthelet

C. Prinsip                      :Urea dihidrolisa dengan adanya air dan urease membentuk ammonia dan
carbon dioksida . pada metode modifikasi Bedrthelet ini,ion ammonia bereaksi dengan hypochlorit dan sallycilate membentuk zat warna hijau, Peningkata Abs.Pada 578 nm proporsional dengan konsentrai urea dalam sample.

D. Bahan                     : Serum,plasma (semua plasma kecuali ammoniumheparinat ),urine.

                                       Encerkan urine 1 + 100 dengan aquadest.

                                       Jangan gunakan serum lipemic.stabil 3 hari pada 4 C.

E. Alat                         :

   l. Spektrofotometer

                                       2. Tabung reaksi

                                       3. Beacker glaas

             4. Pipet automatic

             5. Blue tip dan Yellow tip

F.Reagensia                 : 1. Reagen standart

                                       2. Reagen R1A

                                       3. Reagen R2

            KOMPOSISI REAGEN       

	R1	R2	R3
1. 10505	100 ml	100 ml	1 ml
2. 10506	1000 ml	-	10 ml
3. 10507	-	1000 ml	-
STD	3 ml std. urea 80 mg/dl ( 13,3 mmol/l) atau BUN 37,28 mg/dl (6,2 mmol/l)

                                    PERSIAPAN REAGEN

                                    R1A : Campuran reagen 3 dengan reagen 1 sbb :

                                                Missal : 1 ml R3 + 100 ml R1 ( 1 = 100 bag. )

                                    R2 dan STD siap pakai tanpa pengenceran.

G.Cara Kerja               :

                        Panjang gelombang     : Hg 578

                        Tebal kuvet                 : 1 cm

                        Temperatur                  : 20 – 25⁰ C

                        Pengukuran terhadap blanko reagen

	RB	STD	SPL
Sampel	-	-	10 ul
Standard	-	10	-
Reagen RIA	1000	1000	1000 ul
Campur , inkubasi 5 mnt (20-25 C) atau 3 mnt ( 37 C )
Reagen R2	1000	1000	1000 ul
Campur, inkubasi 10 menit pada 20 - 25 C atau 5 menit pada 37 C. Ukur Abs. standard dA( STD ) dan sampel dA ( SPL ) terhadap RB dalam waktu 60 menit

                         

G. Nilai Rujikan            : Serum : 10 – 50 mg/dl atau 1,7 – 8,3 mmol/l

                                        Urine  : 20 – 35 mg/24 jam atau 333 – 583 mmol/24 jam                                                               

PEMERIKSAAN ASAM URAT

A.    Tujuan             : Untuk mengetahui kadar asam urat dalam darah

B.     Metode            : Uricase PAP

C.     Prinsip             :

Kadar asam urat diukur melalui reaksi dengan uricase. H₂O₂ bereaksi dibawah katalisa peroksidase dengan 3,5-dichloro-2-hydroxybenzenesulfonic acid (DCHBS) dan 4-aminophenazone (PAP) membentuk zat warna merah violet quinoneimine sebagai indicator

D.    Reaksi                         :

                                                       Uricase

Asam Urat + O2 + 2 H₂O                                           allantoin + CO₂ + H₂O₂

                                                    peroxidase

2 H₂O + DCHBS + PAP                                            N–(4-antypiryl) 3-chloro-5-sulfonate- p-benzoquinoneimine + HCl + 4 H₂O                          

E.     Bahan                :  Serum

F.      Alat                   :

⁻         Pipet automatic 20 µl , 1000 µl

⁻         Blue tip

⁻         Yellow tip

⁻         Becker glass

⁻         Tabung venoject

G.    Reagensia          :

⁻         Reagen enzyme

⁻         Larutan standart asam urat 8 mg/dl

H.    Cara Kerja         :

⁻         Disiapkan alat dan bahan

⁻         Disiapkan 3 buah tabung venoject, beri tanda (B, St , T)

⁻         Masing – masing tabung dipipet

	Blanko	Standart	Test
Sampel	-	-	20 µl
Lart. Standart	-	20 µl	-
Rg. Enzym	1000 µl	1000 µl	1000 µl

-          Dihomogenkan

-          Diinkubasi pada suhu 37⁰C selama 5 menit atau 20-25⁰C selama 10 menit

-          Dibaca Absorbance standart dan sampel terhadap reagen blanko pada fotometer

Filter                : 546 nm

Program           : C/St

Standart           : 8,00

-          Dicatat dan dilaporkan hasilnya

I.       Nilai Rujukan    :  Pria             : 3,4 – 7 mg/dl atau 200 – 420 µmol/liter

                             Wanita        : 2,4 – 5,7 mg/dl atau 140 – 340 µmol/liter

PEMERIKSAAN KREATININ ( Dengan Deprot)

A.Tujuan                     : Untuk mengetahui kadar kreatinin dalam serum

B. Metode                   : Jaffe (dengan deproteinase)

C. Prinsip                    : Kreatinin dalam suasana alkali akan membentuk kompleks warna merah

   sampai jingga dengan asam pikrat. Kompleks warna yang terbentuk    

   sebanding dengan kadar kreatinin dalam sampel.

D. Bahan                     : Serum

E. Alat                         : 1. Micropipet 500µ                          4. Tabung reaksi

                                      2. Blue tipe                                        5. Centrifuge  

                                      3. Beackerglass                                 6. Fotometer

F.Reagensia                 :1.TCA (Tri Chlor Acid) 1,2 N 20

                                      2. Asam pikrat dan NaOH = sebagai reagen kerja 1:1

                                      3. Standar 2

                                                                     

G.Cara Kerja               :

Deproteinase

	Blanko	Standar	Tes
Aquadest	0,5 ml
Standar		0,5 ml
Sampel			0,5 ml
Rg TCA	0,5 ml	0,5 ml	0,5 ml
Dicentrifuge dengan kecepatan 4000 rpm selama 10 menit
Diambil supernatannya

Λ      = 546 nm                                Standar  = 200

               Suhu = 25^oC                                    Program = c/st

	Blanko	Standar	Tes
Aquadest	0,5 ml
standar		0,5 ml
Sampel			0,5 ml
Rg kerja	0,5 ml	0,5 ml	0,5 ml

Diinkubasi pada suhu 25oC selama 20 menit . Dibaca pada

fotometer dengan λ 546 nm, program c/st , standar 200.

H. Nilai Rujikan            : Laki-laki    = 0,5-0,9 mg/dl

                                        Perempuan = 0,6-1,1mg/dl

PEMERIKSAAN KREATININ (Tanpa Deprot)

A.Tujuan                     : Untuk mengetahui kadar kreatinin dalam serum

B. Metode                   : Jaffe (tanpa deproteinase)

C. Prinsip                    : Kreatinin dengan asam pikrat membentuk kompleks warna orange

   merah dalam larutan alkali. Absorbance warna kompleks ini sebanding

   dengan konsentrasi kreatinin dalam sampel.

D. Bahan                     : Serum

E. Alat                         : 1. Micropipet 500µ                          4. Tabung reaksi

                                      2. Blue tipe                                        5. Centrifuge  

                                      3. Beackerglass                                 6. Fotomete

F.Reagensia                 :1.Asam pikrat

                                      2. Natrium hidroksida

                                      3. Standar 2 mg/dl   

G.Cara Kerja               :

Λ      = 492 nm                                Standar  = 200

               Suhu = 37^oC                                    Program = c/st

Dipipet ke dalam kuet	semi micro	macro
Sampel/standar	100µl	200µl
Reagen kerja	1000µl	2000µl
Dicampur dan jalankan stopwatch. Setelah 30 detik dibaca pada
Fotometer

H. Nilai Rujikan            : Serum : Laki-Laki   :0,6-1,1 mg/dl

                                                      Perempuan            :0,5-0,9 mg/dl

                                        Urine : 1000-1500 mg/24 jam

PEMERIKSAAN BILIRUBIN DIRECT DAN BILIRUBIN TOTAL

A.    Tujuan                   : Untuk mengetahui kadar Bilirubin Direct (D) dan Bilirubin Total (T)

B.     Metode                  : Jendrassik / Grof

C.     Prinsip                   :          

Bilirubin bereaksi dengan Diazotized Sulphanilic Acid (DSA) membentuk zat warna merah azo. Absorbans zat warna ini pada 546 nm sebanding dengan konsentrasi bilirubin dalam sampel. Glucuronides bilirubin yang larut dalam air bereaksi langsung dengan DSA yang mana albumin yang terkonjugasi dalam bilirubin indirect hanya akan bereaksi dengan DSA, dibantu adanya accelerator (zat pemercepat).

Bilirubin total = bilirubin direct + bilirubin indirect.

D.    Reaksi                   : Asam sulfanilic + natrium nitrit                                DSA

  Bilirubin +DSA                                                         DIRECT azobilirubin

  Bilirubin + accelerator                                               TOTAL azobilirubin

E.     Bahan                    : Serum atau plasma heparin.

  Hindari hemolisis. Sampel harus terlindungi dari sinar.

  Stabilitas : Bilirubin stabil selama 3 hari bila disimpan terlindung dari  sinar pada 2-8°C.

F.      Reagen                  :

1.      1 x 100 ml reagen Bilirubin Total (tutup putih)

Asam sulfanilic                                               14 mmol/l

Asam hydroclorit                                            250 mmol/l

Caffeine (accelerator)                                     200 mmol/l

Natrium benzoate                                            420 mmol/l

2.      1 x 9 ml reagen T-Nitrit (tutup putih)

untuk pengukuran Bilirubin Total

Natrium nitrit                                                  14 mmol/l

3.      1 x 100 ml reagen Bilirubin Direct (tutup merah)

Asam sulfanilic                                               14 mmol/l

Asam hydroclorit                                            250 mmol/l

4.      1 x 9 ml reagen D-Nitrit (tutup merah)

untuk pengukuran Bilirubin Direct

Natrium nitrit                                                  0.9 mmol/l

G.    Alat                       :

1.      Micropipet

2.      Tip biru dan tip kuning

3.      Tabung reaksi

4.      Fotometer

H.    Cara Kerja             :

a.       Persiapan reagen dan stabilitas

1.      Kedua reagen dan larutan nitrit siap pakai.

2.      Stabil sampai tanggal kadaluarsa bila tidak dibuka dan disimpan pada 15-25°C.

b.      Pemeriksaan

Panjang gelombang     : 546 nm

Celah optik                  : 1 cm

Suhu                            : 20-25°C

Pengukuran                 : terhadap blanko sampel

c.       Prosedur

1.      Bilirubin Total

Pipet ke dalam cuvet	Blanko sampel	Sampel
Reagen, bilirubin total (1) Reagen T-Nitrit	1000 µl	1000 µl
	-	40 µl
Campur dengan baik, inkubasi selama 5 menit.
Sampel	100 µl	100 µl
Campur, inkubasi pada suhu kamar selama 10 sampai 30 menit. Ukur absorbans sampel terhadap blanko sampel (∆A546)

2.      Bilirubin Direct

Pipet ke dalam cuvet	Blanko sampel	Sampel
Reagen, bilirubin direct (3) Reagen D-Nitrit	1000 µl	1000 µl
	-	40 µl
Campur dengan baik, inkubasi selama 2 menit.
Sampel	100 µl	100 µl
Campur, inkubasi pada suhu kamar selama 5 menit tepat. Ukur absorbans sampel terhadap blanko sampel (∆A546)

I.       Interpretasi Hasil   :

Linearitas : Pemeriksaan linear sampai 25 mg/dl. Untuk konsentrasi bilirubin melebihi 25 mg/dl, encerkan sampel 1 + 4 dengan garam fisiologis (0.9%) dan ulangi pemeriksaan. Kalikan hasil dengan 5.

J.       Perhitungan           :

Hitung konsentrasi bilirubin total dan direct dengan menggunakan faktor 13.0

Konsentrasi bilirubin (mg/dl) = ∆A₅₄₆  x 13.0

(mg/dl) x 17.1 = (µmol/l)

K.    Nilai Rujukan        :

Bilirubin total	mg/dl	µmol/l
Pada kelahiran, sampai 5 hari, sampai 1 bulan, sampai Dewasa, sampai	5 12 1.5 1.1	85.5 205.0 25.6 18.8
Bilirubin direct
Dewasa, sampai	0.25	4.3

ALKALI PHOSPATASE

A.    Pemeriksaan                :     Alkali Phosphatase

B.     Tujuan                         :     Untuk mengetahui kadar Alkali phosphat

C.     Metode                        :     Optimised Standard Methode sesuai dengan rekomendasi 

                                          DGKC.

D.    Prinsip                         :     p – Nitrophenyl phosphate + H₂O <===> phosphatase

                                                                                                + p - nitrophenol

E.     Reagen                        :     1. Reagen Buffer

2. Larutan Substrat

F.      Bahan                          :     Serum, plasma heparin atau EDTA

G.    Alat                             :     Tabung reaksi , mikropipet 20 µl , 1000 µl, blue and yellow tip,

                                          beacker glass, fotometer

H.    Cara kerja                    :

·      Filter                   : 405 nm

·      Program              :  K20

·      Tebal kuvet         :  1 cm

·      Temperature       :  20-25⁰ C

·      Pengukuran terhadap udara

·      Faktor                 :  2757

	Test
Reagen Kerja	1000 µl
Sampel	20  µl
Campur, ukur absorbans dan pada saat bersamaan jalankan stopwatch. Ulangi pengukuran setelah 1, 2 dan 3 menit.

I.       Nilai normal dalam serum atau plasma :

Wanita             : 64 – 306 U/L

Pria                  : 80 – 306 U/L

PEMERIKSAAN SGOT

1.      Tujuan                        : Untuk mengetahui kadar SGOT di dalam darahseseorang secara                                         fotometris.

2.      Metode Pemeriksaan : Modifikasi IFCC

3.      Prinsip                                  : NADH dioksidasi menjadi NAD+  menghasilkan penurunan absorben pada                                                 340nm  yang secara langsung sebanding dengan aktivitas GOT(Glutamin                                                         Okdaloasetat Transaminase)

4.      Reaksi                        : L-Aspartat + 2-oxoglutarate

GOT Oxaloacetate + L-GlutamateOxaloacetate + NADH + H+

                                     MDH L-Malate + NAD + H

5.      Reagen                       :

a.       Aquadest

b.      Reagen 1

c.       Reagen 2

7. Alat                              :

§  Tabung reaksi

§  Rak tabung reaksi

§  Mikropipet  100cc , 200cc , 1000cc

§  Fotometer

8. Prosedur                      :

a.       Pembuatan Reagen Kerja

Reagen 1 = 800 u/L + Reagen 2 = 200 u/L . Perbandingan = 4 : 1

b.      Prosedur Kerja

Sampel	100 u/L
Reagen Kerja	1000 u/L

c.       Pengukuran

·         Program                     : Kinetik 2

·         Panjang Gelombang : 340nm

·         Suhu                          : 37◦C

·         Faktor                        : 1745

d.      Homogenkan , baca absorbansi terhadap udara setelah 1 menit dan jalankan timer . Baca absorbansi lagi setelah tepat 1, 2, dan 3 menit

e.       Nilai Normal : Laki – Laki = <37 u/L , Perempuan = < 31 u/L

PEMERIKSAAN SGPT

Tujuan

untuk mengetahui fungsi hati

Metode

IFCC (International Federation of Clinical Chemistry

Prinsip

metode kinetik untuk mengukur akivitas ALAT berdasarkan rekomendasi Expert Panel of the IFCC(International Federation of Clinical Chemistry)

Reaksi

2-Oxoglutarate + L-alanine    GPT→L-glutamate + pyruvate

Pyruvate + NADH + H   → LDH    L-lactate + NAD

Bahan

Serum,plasma Heparin atau EDTA.Hindari hemolisa!

Alat

-        Fotometer 4010

-        Pipet automatic 200ul,1000ul,100ul

-        Stopwatch

-        Cuvet

Cara kerja

-        Panjang gelombang : Hg 365nm,340nm,atau 334nm

-        Celah optic : 1cm

-        Suhu : 25-37°C

-        Pengukuran : terhadap udara (penurunan absorbans)

Hangatkan reagen dan cuvet pada suhu yang dikehendaki.Suhu harus dijaga konstan( ±0,5°C) selama pemeriksaan.

Prosedur 1 dengan start sampel

Pipet ke dalam cuvet	25°C atau 30°C	37°C
Sampel	200ul	100ul
Reagen kerja	1000ul	1000ul
Campur,baca absorbans setelah 1 menit dan jalankan stopwatch. Baca absorbans lagi tepat setelah 1,2 dan 3 menit

            Prosedur 2 dengan start reagen

Pipet ke dalam cuvet	25°C,30°C	37°C
Sampel	200ul	100ul
Reagen 1	1000ul	1000ul
Campur,inkubasi selama 5 menit dan jalankan stopwatch
Reagen 2	250ul	250ul
Campur,baca absorbans setelah I menit dan jalankan stopwatch. Baca absorbans lagi tepat setelah 1,2,3 menit.

Perhitungan/Interpretasi hasil

Untuk perhitungan absorbans per menit dalam 0,06-0,08 (Hg 365nm) atau 0,12-0,16 (Hg 334,340nm) , prosedur 1+2 pengukuran hanya dari 2 menit pertama digunakan untuk (1 menit inkubasi,2 menit pengukuran).Hitung aktivias GPT dalam sampel menggunakan factor berikut:

            Prosedur 1 dengan start sampel

	Hg 334nm	Hg 340nm	Hg 365nm
Ul (25°C,30°C)	971	952	1765
Ul (37°C)	1780	1745	3235

            Prosedur 2 dengan start reagen

	Hg 334nm	Hg 340nm	Hg 365nm
Ul (25°C,30°C)	1173	1151	2132
Ul (37°C)	2184	2143	3971

Nilai rujukan

Suhu	25°C	30°C	37°C
Pria	22ul	30ul	42ul
Wanita	17ul	23ul	32ul